![](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2022/06/六边形.jpg)
派真生物专有的 π-Alpha™ 293 AAV 高产平台在三质粒转染系统中使用独特设计的 RC 质粒,可将各种血清型的 AAV 产量提高 3 至 8 倍。结合工艺生产过程中上游和下游 QbD 优化,总 AAV 产量可提高多达 10 倍。 单批AAV生产最多能提供1E+17 vg病毒颗粒,可满足大多数临床级和商业级AAV生产的需求。
优势
![](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2024/05/icon5.png)
用独特设计的辅助RC质粒,提升293细胞体系AAV的产量可达10倍以上
![](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2024/05/icon14-1.png)
生产工艺极大提升悬浮细胞产量达10~25倍
![](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2024/05/icon3.png)
独特工艺极大减少关键杂质(HCD、内毒素等)
![](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2024/05/icon6.png)
关键技术降低空壳率、提升感染滴度
知识产权
- 6项发明获得授权
- 2项发明在申请
![贴壁293体系](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2023/11/贴壁293体系.jpg)
![悬浮293体系](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2023/11/悬浮293体系.jpg)
高产辅助质粒(293细胞/三质粒体系)通过在 Rep-Cap 质粒中添加非编码调控元件获得高产RC 质粒,将 AAV 产量提高 3-8 倍(已申请专利)。
通过关键工艺参数DOE实验优化,悬浮293生产体系总产率提高10倍以上
细胞密度、质粒总量、质粒比例、转染试剂比例
DOE 工程参数 Ambr 反应器(赛多利斯)
搅拌速度 pH 溶氧 温度
DOE 裂解和收获条件
搅拌速度 密度 时间 温度
DOE 转染条件
![AAV产毒数据1](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2023/11/AAV产毒数据1.jpg)
![AAV产毒数据3](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2023/11/AAV产毒数据3.jpg)
![AAV产毒数据2](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2023/11/AAV产毒数据2.jpg)
![AAV产毒数据4](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2023/11/AAV产毒数据4.jpg)
200 L采用293细胞无血清悬浮工艺生产AAV产毒数据
总结
小批量的中试工艺开发策略成功地指导了使用无血清 293 悬浮细胞的 200 L 放大 AAV 生产工艺。
![200L 规模悬浮工艺](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2023/11/200L-规模悬浮工艺.png)
![透射电镜TEM](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2023/11/透射电镜TEM.png)
200 L 规模悬浮工艺实际生产AAV最高达7.3E+16 vg总裂解产量, >30% 回收率
透射电镜TEM
空壳率可低<5%,符合GMP的大规模生产
![分析型超高速离心AUC](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2023/11/分析型超高速离心AUC.jpg)
![AAV产率](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2023/11/AAV产率.jpg)
分析型超高速离心AUC
降低HCD的同时不影响AAV产率
通过对质粒进行独特的分子修饰,显著减少质粒 DNA 残基
![分子修饰](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2023/11/分子修饰.jpg)
![独特分子改造质粒](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2023/11/独特分子改造质粒.jpg)
![超速离心去空壳工艺](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2023/11/超速离心去空壳工艺.jpg)
![批生产量](https://static.packgene.com/wp-content/uploads/2023/11/批生产量.jpg)
独特分子改造质粒极大降低AAV病毒内质粒DNA残留(错包率),AAV产率无显著改变
具备可放大的超速离心去空壳工艺,可满足200~500 L规模的批生产量
优势 | 描述 |
产量提高 | RC质粒的设计使AAV产量提高3-8倍 |
CPP优化将AAV总产量提高10倍 | |
更大规模优势 | 从125 mL到200 L(悬浮液)稳定的放大工艺 |
200 L悬浮产量达7.3E+16 vg(悬浮液) | |
更高安全性 | HCD残留量为30~90 ng/1E+13 vg(悬浮液) |
最佳全衣壳比率表现收获时(20~66%)和最终 (75~94%) | |
新型质粒设计方法减少了90%的包裹质粒杂质 |
π-Alpha™ 293 AAV高产技术平台
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