AAV定制包装 慢病毒定制包装 载体克隆
Lentivirus简介
慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种,它需要相对较长的孵育时间,所以称之为“慢”病毒,Lenti在拉丁文中就是慢的意思。它包括人免疫缺陷病毒(HIV)、猫免疫缺陷病毒(FIV)、猿免疫缺陷病毒(SIV)、牛免疫缺陷病毒等(右图)。其中研究最多的是HIV-1慢病毒。
慢病毒载体(Lentivirus vector)是以慢病毒基因组为基础,由所需的目的基因取代部分基因构建而成。目前使用的慢病毒载体多采用HIV-1基因组改造而来。与一般的逆转录病毒载体相比,慢病毒载体对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力而具有更广的宿主范围。
慢病毒载体还可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而实现持久表达。可以有效感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,又很少引发机体免疫反应。派真生物提供的慢病毒为“自杀”性病毒,即病毒感染目的细胞后不会再感染其他细胞,也不会利用宿主细胞产生新的病毒颗粒。慢病毒中的毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代,属于假型病毒。但该病毒仍然具有潜在的生物学危险,建议不要使用编码已知可能会致癌或有毒性基因的假型病毒,除非已经完全公认某个基因肯定没有致癌性,否则均不建议采用假型病毒进行生物学实验。派真生产的慢病毒其外壳蛋白为VSVG,可广谱感染绝大部分细胞。
派真Lentivirus服务系统
service system
Lentivirus服务介绍 Lentivirus 服务流程 Lentivirus 生产流程 Lentivirus质控方式
LV上清包装
 
LV001,对于仅需要少量病毒进行初筛的细胞实验,如果载体自身产毒滴度足够高,LV慢病毒上清液也能使用。每次生产都会平行进行小规模对照EGFP病毒包装,作为整个生产流程的质控。
LV高滴度包装
 
LV002,LV003(以LTR之间长度6 Kb为包装难易分界线)对于多数使用慢病毒进行的实验,高滴度低毒性是成功的关键。派真生物生产浓缩后的慢病毒滴度达>2E+8 TU/ml,细胞毒性低。如果客户需要用自己的载体生产病毒,请把需要包装的慢病毒质粒寄给派真生物(病毒质粒容易突变,操作注意事项请看病毒质粒操作小TIPs)。如果客户自身的载体从未取得过正常滴度,为确保生产顺利、节约实验时间,建议使用派真入口载体进行重新克隆。派真生物拥有具有多年克隆经验的技术人员,采用最高效的克隆技术,通常只需一步克隆,周期5-8工作日。),派真生物将质粒进行转化、超纯大量提取,再用于三质粒共转染293T细胞生产高纯高滴度慢病毒。
prompt   Lentivirus相关质粒操作小TIPs

(1)在寄出质粒前请做合适的酶切鉴定;
(2)由于Lentivirus载体质粒在常规DH5a菌种37度培养条件下容易产生突变,推荐在Stbl3菌种中以30度培养扩增;
(3)请通过Email发送载体全图谱电子文件(gb或dna格式)给我们,寄运质粒时可把0.5 µg质粒滴在干净滤纸上,用铅笔画出滴加的范围,用保鲜膜包裹隔绝污染;或者把体积大于10ul的5~10ug质粒装于0.5 mL离心管中并用封口膜缠绕确保密封。用有缓冲包装的信封常温快递即可。


立即订购